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NEB/CLIP-Cell™ Block/S9220S/100 nmol

价格: ¥1452.00 市场价: 2420.00

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货号: S9220S-100nmol

品牌: NEB

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  CLIP-Cell™Block(bromothenylcytosine,BTC)isanon-fluorescentcompoundthatblocksthereactivityoftheCLIP-tag™invitroandinsideoronthesurfaceoflivingcells.ItcanbeusedtogenerateinactivecontrolsinlivecelllabelingexperimentsperformedwithCLIP-tagfusionproteins.BTCreactswithCLIP-tagirreversIBLy,inactivatingitforsubsequentlabelingsteps.
  
  TheCLIP-tagproteinlabelingsystemenablesthespecific,covalentattachmentofvirtuallyanymoleculetoaproteinofinterest.CLIP-tagisaproteintagbasedonhumanO⁶-alkylguanine-DNAalkyltransferase(hAGT).CLIP-tagsubstratesarederivativesofbenzylcytosine(BC).Inthelabelingreaction,thesubstitutedbenzylgroupofthesubstrateiscovalentlyattachedtothereactivecysteineofCLIP-tagformingastablethioetherbond. AlthoughCLIP-tagisbasedonthesameproteinasSNAP-tag®,thebenzylcytosinesubstratesformaseparateclassofsubstrates,differentfromthebenzylguaninesubstratesrecognizedbySNAP-tag.CLIP-tagandSNAP-tagcanbeusedfororthogonalandcomplementarylabelingoftwoproteinssimultaneouslyinthesamecells.
  
  Therearetwostepstousingthissystem:subcloningandexpressionoftheproteinofinterestasaCLIP-tagfusion,andlabelingofthefusionwiththeCLIP-tagsubstrateofchoice.TheuseofBTCduringthelabelingoffusionproteinswithCLIP-Cellsubstratesisdescribedinthisdocument.
  Figure1:StructureofCLIP-CellBlock(MW286.1)
  Notes:
  Storage:CLIP-CellBlockshouldbestoredat-20°C(longterm)orat4°C(shortterm).Withproperstorageat-20°C,CLIP-CellBlockisstableforatleastthreeyearsdryorforthreemonthswhendissolvedinDMSO.FortroubleshootingpleaserefertotheinstructionssuppliedwithCLIP-Cellproductsasappropriate.Pleasenotethatthereisaconstantturnoverandresynthesisofproteinsinthecell.AfterhavingblockedallexistingCLIP-tagfusionproteinswithinthecell,newCLIP-tagfusionproteinmoleculesmaybesynthesizedinthemeantimeandmaygetlabeledduringincubationwithafluorescentCLIP-tagsubstrate.Thiswillgivetheimpressionthattheblockingwasineffective.Inordertominimizetheseeffectsofproteinsynthesisandproteintransport,cellsmayhavetobetreatedwithcycloheximideandincubationwiththefluorescentCLIP-tagsubstratemayhavetobeperformedat4°C.
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