◆实验过程中没有纯化步骤,我如何将未标记上的荧光染料除去?该问题描述了我们研发的关键因素,我们独特的染料、缓冲液组分以及完善的标记策略已经完美地解决了这个问题,具体机制涉及专利保护,不便透露。◆Super-n-stain® 试剂盒可用于多色免疫标记吗,不同抗体间是否会发生染料转移?Super-n-stain® 试剂盒抗体与染料是共价结合方式,不存在染料扩散和转移现象。详细信息请参照上面产品说明部分。◆Super-n-stain® 试剂盒可用于标记抗体以外的蛋白吗?该试剂盒是针对 IgG 抗体标记优化设计的,不推荐用于标记其它蛋白。Super-n-stain® 标记条件可能会导致 IgM 变性。◆Super-n-stain® 试剂盒标记一抗和二抗的灵敏性是否一样?直接免疫荧光检测信号会弱于间接检测,详细信息请参照上面产品说明部分。◆用标记二抗的间接标记相比,直接标记复合物有哪些优势?直接免疫染色避免了二抗孵育和清洗的步骤,容许来自同一物种的多个抗体同时使用进行多色检测,可以使用来自同一物种的抗体进行动物组织染色,从而避免了二抗的交叉反应。◆Super-n-stain® 试剂盒与 Invitrogen’s Zenon 抗体标记试剂盒相比,有哪些优势?主要优势: 1. YF 染料与抗体共价结合避免了多重染色时染料转移和扩散现象; 2. Super-n-stain® 复合物在储液中可稳定保存几个月之久,而 Zenon 标记物必须在 30min 内使用; 3. Super-n-stain® 复合物体积更小些,因为染料直接与抗体结合,而 Zenon 复合物与抗体片段配合使用; 4. 无需进行 YF 染料与标记蛋白的比例优化,直接混合、染色即可; 5. 无需进行后染固定; 6.没有种属特异性◆Super-n-stain® 试剂盒与 Innova Bioscience Lightning-link 快速抗体标记试剂盒相比,有哪些优势?
Super-n-stain® 试剂盒使用荧光更亮、光稳定性更好的 YF 染料,试剂盒规格更灵活,可提供至单个抗体标记反应。
◆什么是 YF 染料?
YF 染料是一种水溶性较好、用于标记蛋白和核酸的小分子有机染料。我们可提供多达 20 种的此类 YF 染料。◆我应如何选择 Super-n-stain® 试剂盒?
每种 YF 染料,我们都提供三种不同抗体标记量的试剂盒,分别是:5-20 μg, 20-50 μg, 50-100 μg。对于没有稳定剂的抗体标记,根据抗体规格,选择其中一种即可,含有稳定剂的抗体标记,请参考产品描述中的表 1。◆若待标记抗体总量适用于两种 Super-n-stain® 试剂盒,我应如何选择?
例如:标记 50 μg 抗体,我应购买 50-100 μg 抗体标记试剂盒还是 20-50μg 的试剂盒?
遇到这种情况,两种规格都可以得到较好的结果,使用较小规格的效果更好。
◆如何选择染料与蛋白的比例获得较好的标记效果?
如果待标记的抗体量在试剂盒范围内,无需改变染料量或反应时间,因为 Super-n-stain® 试剂盒中染料和反应缓冲液可以确保较好的标记效果。◆我可以拆分试剂盒组分,以便多次使用吗?不行,因为 Super-n-stain® 试剂盒已经优化至一个标记单位,我们不建议拆分试剂盒以标记多个抗体或多次使用。◆抗体浓度是否影响标记效率?Super-n-stain® 试剂盒较好的标记抗体浓度为 0.5-1 mg/mL,您可通过浓缩或稀释使待标记抗体达到上述浓度范围,小于或超过该浓度范围,会导致标记效率过低或过多。◆使用标记后的抗体进行免疫荧光染色未观察到荧光信号?与供应商联系,确保抗体组分、浓度在容许范围内。◆使用标记后的抗体进行免疫荧光染色未观察到荧光信号怎么办?
与供应商联系,确保抗体组分、浓度在容许范围内。在直接标记前,应确定用于间接标记的一抗的敏感性和特异性。为了得到与间接标记相同的信号强度,直接标记时需要使用更高浓度的一抗,更多信息请参考产品应用部分。共价标记可能会影响某些抗体的反应活性。可以通过实验确定是否是这一因素的原因,即使用 Super-n-stain® 标记的一抗和荧光标记的二抗进行间接免疫染色,以确定 Super-n-stain® 标记后的一抗是否仍具有反应活性。如果有兼容 YF 染料的激发/发射波长的荧光读胶仪或扫描仪,可以通过 SDS-PAGE 电泳确定抗体是否标记上染料,取 0.1-0.5 μg 标记抗体进行变性 SDS-PAGE电泳,然后进行凝胶拍照,你应该可以观察到 IgG 的 55 kDa 的重链和 25 kDa 的轻链对应的两条荧光条带。