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NEB/pCLuc-Basic 2 Vector/N0317S/20 μg

价格: ¥3516.00 市场价: 5860.00

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货号: N0317S-20μg

品牌: NEB

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- Description:
  pCLuc-Basic2isacloningvectorforexpressioninmammaliancells,containingareportergenebutlackingpromoterelements.ThereportergeneisthesecretedluciferasefromtheOstracodCypridinanoctiluca.CypridinaLuciferase(CLuc)isa62kDaproteinwithanativesignalpeptideattheN-terminusthatallowsittobesecretedfrommammaliancells(1)sothatCLucactivitycanbedetectedintheculturemedium.ThepCLuc-Basic2Vectorcontainsamultiplecloningsite(MCS)upstreamoftheCLuccodingsequence.AneomycinresistancegeneunderthecontroloftheSV40promoterallowsselectionforstableintegrationoftheplasmidintothemammaliancellgenomeusingG418.
  
  RecommendedsequencingprimersforpCLuc-Basic2:
  UpstreamofMCS:
  pBasicForwardSequencingPrimer(23-mer) (notavailablefromNEB)
  5´-GGGGTTCCGCGCACATTTCCCCG-3´(6020–6042)
  
  pBasicReversePrimer(25-mer)(notavailablefromNEB)
  5´-TCAGAAGCCATAGAGCCCACCGCAT-3´(1888–1864)
  
  CLuc3´EndForwardPrimer(23-mer)(notavailablefromNEB)
  5´-GAGTTCAAGAAAGAATGCTACAT-3´(1671–1693)
  
  CLuc5´EndReversePrimer(24-mer)(notavailablefromNEB)
  5´-GTAAGGACAGTCCTGGCAATGAAC-3´(143–120)
  
  Figure1:CypridinaLuciferase(CLuc)activityobtainedfromdifferentCLucplasmids
  HeLacellsupernatants(20μl)andlysates(5μl)wereassayedwiththeBioLuxCLucAssayKit(NEB#E3309).HeLacellswereseededin12-wellplatesandtransfectedwith50ngofCLuc-expressingplasmidperwell.At24hrpost-transfection,supernatantswerecollectedandcelllysedin100μlperwellusingLuciferaseCellLysisBuffer(NEB#B3321).TheCLucactivitywasmeasuredinaMithrasLB940(BertholdTechnologies)luminometersetto:50μlofinjection,2secondsofdelayand2secondsofintegration.
  Figure2: pCLuc-Basic2multiplecloningsite(MCS)
  
  TheCypridinaLuciferasesequenceisshownwithabluebackground.Onlyuniquerestrictionsitesareshown.
  DNASUandAddgenearecentralrepositoriesforplasmidclonesandcollectionsthatmayalsobehelpful.
  Highlights
  - PolylinkerMCS:20–68
  - StartcodonofCLuc:75–77Stopcodon:1734–1736
  - Signalpeptide:75–128
  - Syntheticpoly-Asite:1745–1793
  - Neopromoter(SV40):2379–2714
  - Neomycinresistancegene:2766–3560
  - Bacterialreplicationori(pMB1):4894–4306
  - Ampresistance:5925–5065
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