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注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。
产品介绍 Mouse TNF-α ELISA Kit (Mouse Tumor Necrosis Factor-α Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即小鼠肿瘤坏死因子α ELISA 试剂盒，可以定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 TNF-α浓度。TNF-α是一种主要由单核细胞和巨噬细胞产生的单核因子。小鼠的 TNF-基因长约 2.78 kb，由 4 个外显子和 3 个内含子组成。小鼠 TNF-前体含 235 个氨基酸残基，信号肽为 79 氨基酸残基。成熟的小鼠 TNF-分子量为 17 kDa，由 156 个氨基酸残基组成，第 69 位和 100 位两个半胱氨酸形成分子内二硫键，有一个糖基化点，但糖基化不影响其生物学功能。鼠与人的 TNF-有 79％氨基酸组成同源性，TNF-的生物学作用无明显的种属特异性。小鼠的 TNF-是由活化的巨噬细胞及其它类型的细胞，包括 T 细胞和 B 细胞，NK 细胞，LAK 细胞，星形胶质细胞，内皮细胞，平滑肌细胞和某些肿瘤细胞产生。TNF-α的生物学活性非常复杂，包括对造血、免疫和炎症的调节；对血管和凝血的影响和对多种器官（肝、心脏、骨、软骨、肌肉和其它组织）的作用。如杀伤或抑制肿瘤细胞；提高中性粒细胞的吞噬能力，增加过氧化物阴离子产生，增强 ADCC 功能，刺激细胞脱颗粒和分泌髓过氧化物酶；抗感染；促进髓样白血病细胞向巨噬细胞分化；促进细胞增殖和分化等。在临床上，应用 TNF 在治疗肿瘤等方面开始临床Ⅱ 期试验，也可与 IL-2 联合治疗肿瘤。TNF-α的抗肿瘤作用包括 TNF-α的直接作用和 TNF-α诱导的针对肿瘤的免疫应答。TNF-α参与包括哮喘，Π型糖尿病，Crohn’s 病，和风湿性关节炎等疾病。TNF 刺激内皮细胞，导致炎症、组织损伤和凝血从而诱发感染性休克。TNF-α又称恶液素，可诱发机体发生恶液质。TNF 还具有类似 IFN 抗病毒作用，阻止病毒早期蛋白质的合成，从而抑制病毒的复制，并与 IFN-α和 IFN-γ协同抗病毒作用。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中小鼠 TNF-α浓度。在小鼠TNF-α单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的TNF-α会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗小鼠TNF-α抗体，抗小鼠 TNF-α抗体与结合在单抗上的小鼠TNF-α结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有TNF-α，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在450 nm下测OD值，小鼠TNF-α浓度与OD 450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中小鼠TNF-α浓度。
UE-M6152S/M6152M/M6152L◆没有信号？1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。◆整块板呈现规则蓝色？1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。◆标准曲线差？1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。
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