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特别 提示
注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。
产品介绍 Mouse IL-5 ELISA Kit (Mouse Interleukin-5 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即小鼠白细胞介素 5 ELISA 试剂盒，可以定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 IL-5 浓度。IL-5 是一种多效性细胞因子，主要由 T 细胞生产，在小鼠中由 Th 2 亚群细胞产生，在人类中 IL-5 则主要由活化 T 细胞产生。小鼠 IL-5 由 133 氨基酸残基组成，含 21 氨基酸的信号肽，成熟 IL-5 分子含有 112 氨基酸残基，裸肽分子量 12-15 kDa，有 3 个糖基化位点，糖基化后分子量为 18 kDa，糖基化对于 IL-5 活性表达以及与相应受体的结合起重要作用。小鼠 IL-5 通常以二硫键连接的二聚体形式存在，分子量为 45 kDa。人和小鼠 IL-5 基因分别定位于第 5 号和第 11 号染色体，与 IL-3、IL-4、GM-CSF 等造血因子的基因密切连锁。人和鼠 IL-5 在氨基酸水平上有 70％的同源性，生物学作用有交叉反应；人和鼠 IL-5Rα链有 79％的同源性。IL-5 的生物学活性与其它 IL 相比，IL-5 生物学活性作用谱相对较窄。如：小鼠 IL-5 促进抗原刺激的 B 细胞分化为抗体合成细胞，主要作用于进入细胞增殖后期的 B 细胞，并增加活化 B 细胞 IL-2R 的表达，IL-5 的这种刺激作用与人 IL-6 功能相似，人 IL-5 只作用于 B 细胞刺激后很窄的时相内；协同 ConA 或 IL-2 诱导胸腺中杀伤性 T 细胞前体 (CTPp)分化为 CTL；趋化人嗜酸性粒细胞，延长成熟嗜酸性粒细胞的存活时间，刺激人和小鼠嗜酸性粒细胞的功能，诱导嗜酸性粒细胞的分化。本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法检测样品中小鼠 IL-5 浓度。在小鼠 IL-5 单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的 IL-5 会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗小鼠 IL-5 抗体，抗小鼠 IL-5 抗体与结合在单抗上的小鼠 IL-5 结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有 IL-5，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在 450 nm 下测 OD 值，小鼠 IL-5 浓度与 OD 450 值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中小鼠 IL-5 浓度。
UE-M6148S/M6148M/M6148L◆没有信号？1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。◆整块板呈现规则蓝色？1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。◆标准曲线差？1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。
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