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NEB/ProtoScript® II Reverse Transcriptase/M0368S/10,000 units

价格: ¥2040.00 市场价: 3400.00

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货号: M0368S-10,000units

品牌: NEB

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- Description:
  ProtoScript®IIReverseTranscriptaseisarecombinantM-MuLVreversetranscriptasewithreducedRNaseHactivityandincreasedThermostABIlity.ItcanbeusedtosynthesizefirststrandCDNAathighertemperaturesthanthewildtypeM-MuLV.Theenzymeisactiveupto48°C,providinghigherspecificity,higheryieldofcDNAandmorefull-lengthcDNAproductupto12kb.
  
  ProtoscriptIIReverseTranscriptaseperformsaswellasotherRNaseH^– ReverseTranscriptases
  
  JurkattotalRNA(1μg)wasusedina20μlfirststrandcDNAsynthesis.Mixturesofallreactioncomponents,exceptforreversetranscriptase,wereheldatdifferenttemperaturesfor3min.200unitsSuperScript®II(A)orNEB’sProtoScriptIIReverseTranscriptase (B)wasaddedandincubatedattheindicatedtemperaturefor50minutes,followedbyheatinactivationfor5minat80°C.1μlofcDNAwasusedina25μlPCRusingLongAmp Taq MasterMix(NEB#M0533)for35–40cycles. LadderListhe2LogDNALadder(NEB#N0469).
  RobustcDNAsynthesisisachievedevenwithlongertemplates
  
  JurkattotalRNA(1μg)wasusedina20μlfirststrandcDNAsynthesiswith200unitsofNEBProtoScriptIIReverseTranscriptase.Reactionswereincubatedat42°Cfor50minutes,followedbyheatinactivationfor5minutesat80°C.1μlofcDNAwasusedina25μlPCRusingLongAmp Taq MasterMix(NEB#M0533)for35–40cycles.Sizesareindicatedabovegel.
  GeneratehighqualitycDNAevenwithverylowamountsofstartingRNA
  
  DecreasingamountsofJurkattotalRNA(1μg–1pg)wereusedin20μlfirststrandcDNAsynthesiswith200unitsofNEBProtoScriptIIReverseTranscriptase.Reactionswereincubatedat42°Cfor50minutes,followedbyheatinactivationfor5minutesat80°C.1μlofcDNAwasusedina25μlPCRusingLongAmp Taq MasterMix(NEB#M0533)for40cycles.Thetargetisa0.6kbfragmentofGAPDH.LadderListhe2-LogDNALadder(NEB#N0469).
  ProtoScriptIIReverseTranscriptase displayssuperiorsensitivity
  
  DecreasingamountsofluciferasemRNA(10⁹ to10²)moleculeswereconvertedintocDNAinthepresenceof1ngJurkattotalRNAusing50unitsofNEBProtoScriptIIReverseTranscriptase inatotalreactionvolumeof20μl.1/20ofthecDNAproductwasamplifiedusingSsoAdvanced™SYBR®GreenSupermix.Asfewas5moleculesofluciferasemRNAaredetectable.
  ProductSource
  ThegeneencodingamutantM-MuLVReverseTranscriptase(RNaseH^–)isexpressedinE. coliandpurifiedtonearhomogeneity.
  ReagentsSupplied
  Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:
  Storeat(°C) Concentration
  ProtoScript®IIReverseTranscriptaseReactionBuffer -20 5X
  DTT(100mM) -20 10X
  Notes:
  ReactionConditions:1XProtoScriptIIReverseTranscriptaseReactionBuffer,10mM DTT,200unitsProtoScriptIIReverseTranscriptase,supplementedwith0.5mMdNTPs(notincluded)and5µMdT23VN(notincluded).Incubateat42°Cfor50minutes.If randomprimersareused,a10minuteincubationatroomtemperatureisrecommendedbeforetransferringto42°C.
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