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NEB/Cre Recombinase/M0298S/250 units

价格: ¥3216.00 市场价: 5360.00

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货号: M0298S-250units

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- Description:
  CreRecombinaseisaTypeItopoisomerasefrombacteriophageP1thatcatalyzesthesite-specificrecombinationofDNAbetweenloxPsites(1).TheenzymerequiresnoenergycofactorsandCre-mediatedrecombinationquicklyreachesequilibriumbetweensubstrateandreactionproducts(2).TheloxPrecognitionelementisa34basepair(bp)sequencecomprisedoftwo13bpinvertedrepeatsflankingan8bpspacerregionwhichconfersdirectionality(3).RecombinationproductsdependonthelocationandrelativeorientationoftheloxPsites.TwoDNAspeciescontainingsingleloxPsiteswillbefused.DNAbetweendirectlyrepeatedloxPsiteswillbeexcisedincircularformwhileDNAbetweenopposingloxPsiteswillbeinvertedwithrespecttoexternalsequences.
  Figure1.
  CreRecombinaseReactionwithloxP2+controlsubstrate.Thereactionsyieldsa20-30%recombination.MarkerMis2-LogDNALadder(NEB#N0469).
  Highlights
  - Isolatedfromarecombinantsource
  - ExcisionofDNAbetweentwoloxPsites
  - FusionofDNAmoleculescontainingloxPsites
  - InversionofDNAbetweenloxPsites
  ProductSource
  PurifiedfromanE.colistraincarryingaplasmidencodingCreRecombinasefrombacteriophageP1withadditionalN-terminalAlaandGlyresidues(4).
  ReagentsSupplied
  Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:
  Storeat(°C) Concentration
  CreRecombinaseReactionBuffer -20 10X
  pLox2+(linearized) -20 125ng/μl
  Notes:
  IncubationoftheCreRecombinasereactionmixat70°Cfor10minutesisrecommendedbeforeagarosegelanalysis.BecausetheCreRecombinasereactionisanequilibriumreaction,weobserve20-30%recombinationonourloxP2+controlsubstrate(Fig.1).Thismodestyieldproducesafaintbandonanethidiumbromidestainedgelandtheconcomitantreductioninsubstratestainingintensity.Longerincubationtimeswillnotimproverecombination,andinstead,willlikelyleadtohighermolecularweightrecombinationproducts.IncreasingtheamountofCreRecombinaseinthereactioncaninhibitrecombinationbyformingloxPdependentCre-DNAaggregates.ControlDNA:LinearizedpLox2+is3,625bpinlength,withaloxPsiteapproximately400bpfromeachend.BetweentheloxPsiteslieanoriginofreplicationandampicillin-resistancegene.RecombinationbetweentheseloxPsitesproducesacircular(2,787bp),ampicillin-resistantplasmid(whichmigratesatapproximately1.7kbona0.8%agarosegel)andone838bpDNAfragment.
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