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NEB/McrBC/M0272S/2,500 units

价格: ¥3312.00 市场价: 5520.00

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货号: M0272S-2,500units

品牌: NEB

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- Description:
  RecognitionSite:
  McrBCisanendonucleasewhichcleavesDNAcontainingmethylcytosine*ononeorbothstrands.McrBCwillnotactuponunmethylatedDNA(1).SitesontheDNArecognizedbyMcrBCconsistoftwohalf-sitesoftheform(G/A)^mC.Thesehalf-sitescanbeseparatedbyupto3kb,buttheoptimalseparationis55-103basepairs(2,3).McrBCrequiresGTPforcleavage,butinthepresenceofanon-hydrolyzableanalogofGTP,theenzymewillbindtomethylatedDNAspecifically,withoutcleavage(4).
  *5-methylcytosineor5-hydroxymethylcytosineorN4-methylcytosine(5).
  Linearizedplasmid(methylatedorunmethylated),containingoneMcrBCsite,incubatedwithMcrBC.Lane1,unmethylatedDNA;Lane2,methylatedDNA;Lane3,Marker:LamBDaDNABstEIIdigest.
  HumanandDrosophilagenomicDNAincubatedwithMcrBC.60-90%ofCpGsinvertebrateDNAareestimatedtobemethylated(6)whilemethylatedCpGsareextremelyrareinDrosophilaDNA(7).Lane1,HumanDNA;Lane2,HumanDNAincubatedwithMcrBC;Lane3,DrosophilaDNA;Lane4,DrosophilaDNAincubatedwithMcrBC;Lane4,Marker:LambdaDNABstEIIdigest.
  ProductSource
  ThetwocomponentproteinsarepurifiedseparatelyfromE.coliK-12strainscontainingplasmidsencodingMcrBandMcrC(1).
  ReagentsSupplied
  Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:
  Storeat(°C) Concentration
  NEBuffer™2 -20 10X
  PlasmidDNAforMcrBCLinearizedmethylated(20µl) 100μg/ml
  GTP -20 100X
  PurifiedBSA -20 10X
  Notes:
  McrBCmakesonecutbetweeneachpairofhalf-sites,cuttingclosetoonehalf-siteortheother,butcleavagepositionsaredistributedoverseveralbasepairsapproximately30basepairsfromthemethylatedbase(2).Therefore,theenzymedoesnotproducedefinedDNAendsuponcleavage.Also,whenmultipleMcrBChalf-sitesarepresentinDNA(asisthecasewithcytosine-methylatedgenomicDNA)theflexIBLenatureoftherecognitionsequenceresultsinanoverlapofsites,andsoasmearedratherthanasharpbandingpatternisproduced.McrBCcleavageofthesupplied4.3kblinear,methylatedcontrolplasmidDNAproducesseveralfragmentsbetweenapproximately700bpand2.3kbinsize.GTPismorelABIlethanothernucleotides.Werecommendaliquotingthe100mMsolutionsuppliedandthawinganddilutingasnecessary.
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