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特别 提示
注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。
产品介绍 Human Leptin ELISA Kit (Human Leptin Enzyme -Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人瘦素 ELISA 试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 Leptin 浓度。人瘦素蛋白是一种分子量为16 kDa，长度为146个氨基酸残基，具有强亲水性的非糖基化多肽，主要参与调节脂肪组织体积和能量平衡。成熟的人瘦素分别与小鼠和大鼠瘦素蛋白有87％和84％的同源性，已发现人瘦素在小鼠和大鼠系统中起作用。瘦素的表达是非常有限的，它主要由白色脂肪组织产生。白色脂肪组织分泌瘦素与体内脂肪含量成正比，机体的体脂量是影响瘦素分泌的主要因素。此外，能量摄入的改变、睡眠、体温、性别、自身的昼夜节律性、其它激素等均可影响其分泌和表达。一般来说，正常的血液中瘦素水平已发现的低于纳克/毫升浓度。Leptin受体OB-R是Leptin作用于下丘脑的一座桥梁，Leptin通过下丘脑的特定受体抑制摄食、增加能量消耗，在脂肪蓄积、体重调节中起着重要作用。Leptin在血浆中的水平与脂肪组织量大小相关，当人和鼠体重下降时，Leptin在血浆中的水平也随之会下降。瘦素主要通过抑制食欲，减少能量摄入；增加能量消耗；抑制脂肪合成3种途径调节机体脂肪的沉积、代谢，减轻体重。其中，前两条途径主要通过瘦素与其下丘脑的受体结合发挥其中枢作用而实现的。随着LPR被发现广泛分布在各外周组织，后一途径就可能与它的外周作用有关。作为一种激素，瘦素具有抑制摄食，促进能量消耗，调节代谢，影响激素分泌、生殖、免疫和血管增生等广泛的生物学作用，而这些作用的发挥需要与其特异的受体结合。改变循环瘦素水平可用来研究动脉粥样硬化，生长激素缺乏症，和饮食失调如神经性厌食症。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中人Leptin 浓度。在人Leptin单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的Leptin会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗人Leptin抗体，抗人Leptin抗体与结合在单抗上的人Leptin结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有Leptin，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在450 nm下测OD值，人Leptin浓度与OD 450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中人Leptin浓度。
UE-H6133S/H6133M/H6133L◆没有信号？1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。◆整块板呈现规则蓝色？1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。◆标准曲线差？1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。
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