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注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。
产品介绍Human IL-1β ELISA Kit (Human Interleukin-1β Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人白细胞介素 1β ELISA 试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 IL-1β浓度。IL-1 分为 IL-1α、IL-1β两种，完整的人 IL-1α和 IL-1β 基因组分别为 10.5 kb 和 7.8 kb。人和小鼠 IL-1 基因定位于 2 号染色体，均含 7 个外显子。IL-1 前体(ProIL-1)为 31 kDa，通过蛋白水解酶裂解形成成熟的 IL-1 分子。IL-1 在不同种属中有较高同源性。在氨基酸水平上，IL-1α和 IL-1β在不同种属同源性分别为 60％-70％和 75％-78％；但在同一种属中 IL-1α与 IL-1β同源性只有 25％。人 IL-1α和 IL-1β分别由 159 和 153 个氨基酸残基组成，分子量约 17 kDa, 等电点分别为 5 和 7，同源性为 28%。IL-1 主要是通过与其受体结合形成 IL-1 受体 (IL-1R)复合物发挥生物学作用。T 细胞、成纤维细胞表面 IL-1R 为 80 kDa，而B 细胞则为68 kDa，分别称为IL-1RI (CDw 121 a)和IL-1RⅡ(CDw 121 b)。IL-1受体复合物至少由IL-1α或IL-1β，Ⅰ型IL-1R (IL-1 RⅠ)，IL-1R 辅助蛋白 (IL-1 RAcP)三部分组成。这一复合物介导了 IL-1 的信号转导。IL-1α和 IL-1β是 IL-1R 激动性配基。IL-1 RAcP 是分子量约为 66 kDa 的多肽。细胞表面单独存在的 IL-1RⅠ与配体结合后仍然是不活跃的，只有 IL-1RAcP 结合上去后，才能从不活跃状态转变成有激活功能的 IL-1 受体复合物。IL-1 与 IL-1RtⅡ结合后易发生降解，因此被认为是下调受体。IL-1β主要由血液中的单核细胞和巨噬细胞产生, 星形细胞，少突神经胶质细胞，肾上腺皮质细胞，NK 细胞，内皮细胞，角质形成细胞，巨核细胞，血小板，神经元，中性粒细胞，成骨细胞，许旺细胞，滋养层细胞，T 细胞和成纤维细胞也可产生 IL-1β 。IL-1 具有广泛的免疫调节作用，并有致热和介导炎症的作用。本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法检测样品中人 IL-1β浓度。在人 IL-1β单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的 IL-1β会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗人 IL-1β抗体，抗人 IL-1β抗体与结合在单抗上的人 IL-1β结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有 IL-1β，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在 450 nm 下测 OD 值，人 IL-1β 浓度与 OD 450 值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中人 IL-1β浓度。
UE-H6129S/H6129M/H6129L◆没有信号？1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。◆整块板呈现规则蓝色？1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。◆标准曲线差？1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。
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