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NEB/PURExpress® Δ Ribosome Kit/E3313S/10 reactions

价格: ¥3936.00 市场价: 6560.00

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货号: E3313S-10reactions

品牌: NEB

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- Description:
  Arapidmethodforgeneexpressionanalysis,PURExpress^®isanovelcell-freetranscription/translationsystemreconstitutedfromthepurifiedcomponentsnecessaryforE.colitranslation.Withminimalnucleaseandproteaseactivity,thePURExpresssystempreservestheintegrityofDNAandRNAtemplates/complexesandresultsinproteinsthatarefreeofmodificationanddegradation.Transcriptionandtranslationarecarriedoutinaone-stepreaction,andrequirethemixingofonlytwotubes.Withresultsavailableinafewhours,PURExpresssavesvaluablelaboratorytimeandisidealforhighthroughputtechnologies.
  
  PURExpressCitations
  
  Figure1:ProteinexpressionusingthePURExpress®InVitroProteinSynthesisKit
  25μlreactionscontaining250ngtemplateDNAand20unitsRNaseInhibitorwereincubatedat37°Cfor2hours.2.5μlofeachreactionwasanalyzedbySDS-PAGEusinga10–20%Tris-glycinegel.Thereddotindicatestheproteinofinterest.MarkerMistheProteinLadder(NEB#P7703).
  Figure2:Incorporationof35S-methionineenablesvisualizationofproteinbyautorADIography
  25μlreactionscontaining250ngtemplateDNA,20unitsRNaseInhibitorand2μl35S-metwereincubatedat37°Cfor2hours.2.5μlofeachreactionwasanalyzedbySDS-PAGE,thegelwasfixedfor10minutes,driedfor2hoursat80°Candexposedtox-rayfilmfor5hoursat-80°C.
  Figure3:SchematicdiagramofproteinsynthesisandpurificationbyPURExpress
  
  Figure4:ExpressionandreversepurificationofDHFR(A)andT4DNALigase(B)usingPURExpress
  125μlreactionswerecarriedoutaccordingtorecommendationsintheaccompanyingmanual.Sampleswereanalyzedona10–20%Tris-glycinegelandstainedwithCoomassieBlue.Notethatinbothcases,thedesiredproteincanbevisualizedinthetotalproteinfraction.Thereddotindicatestheproteinofinterest.MarkerMistheProteinLadder(NEB#P7703).
  Highlights
  - CleanerSystem-sampledegradationeliminated
  - Easy-to-use-proteinexpressioncompleteinapproximatelytwohours
  - SimpleAnalysis-proteincanoftenbevisualizeddirectlyonaCoomassiestainedgel
  KitComponents
  Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:
  Storeat(°C) Concentration
  FactorMix
  E.coliRibosome -80
  PURExpressSolutionA
  Control(DHFR)template
  Notes:
  TheDHFRcontroltemplateisnowsuppliedat125 ng/µl.Use2µlforthepositivecontrolreaction.Weuse60pmolesofribosomesinastandard25 μlreaction.Thesuppliedcontrolribosomesareenoughfortworeactions.Note:UsingasmalleramountofribosomesispossIBLebuttheproteinyieldmaybelower. Fordetailedusageinformationpleaserefertotheproductmanual.PURExpressControlTemplatesequencefiles:Fasta,GenBankStorage:Allkitcomponentsshouldbestoredat-80°C.
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