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NEB/NEB® PCR Cloning Kit/E1202S/20 reactions
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NEB/NEB® PCR Cloning Kit/E1202S/20 reactions

价格: ¥3300.00 市场价: 5500.00
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货号: E1202S-20reactions
品牌: NEB
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    • Description:

      • ForbothBluntandT/ACloning
      • UpdatedtoallowforinvitrotranscriptionwithbothSP6andT7promoters
      • BsaI-siteremovedfromampicillin-resistantgene(allowsforcloningofGoldenGateAssemblymodules)
      • Morerestrictionsitesadded,includingfour8-basecutters

      ThisPCRCloningKitcontainsanoptimizedCloningMixcontainingaproprietaryligationenhancerandalinearizedvectorthatusesanovelmechanismforbackgroundcolonysuppressiontogivealowbackground.ItallowssimpleandquickcloningofanyPCRamplicon,whethertheamplificationreactionsareperformedwithproofreADIngDNApolymerases,suchasQ5®whichproducebluntends;ornonproofreadingDNApolymerases,suchasTaqorTaqmixes(OneTaq®,LongAmp®Taq)whichproducesinglebaseoverhangs.ThisispossIBLedueto“invisible”endpolishingcomponentsinthemastermixthatareactiveduringtheligationsteponlyifneeded.Thekitalsoallowsdirectcloningfromamplificationreactionswithoutpurification,andworkswellwhetherornottheprimersusedinthePCRpossess5´-phosphategroups.Tolearnmoreabouthowthekitworks,pleaseviewourvideo.

      Theultimatein flexibility: clonewithanyampliconmadewithany DNApolymerase,withorwithout5´phosphates,purifiedornot!

      PCRcloningwith low/nobackground
      A500bpPCRproductincubatedwiththelinearizedvectorina3:1ratio accordingtorecommendedprotocol.2μlofreactionwastransformedinto providedNEB10-betaCompetentE.coliand1/20thoftheoutgrowthwas plated.Leftplateservesasthecontrol,withvectorbackboneonly,rightplate containsPCRinsert.
      CloningKitProtocolOverviewProtocol

      pMiniT2.0VectorMap

      Mapshownabovedisplaystheconstructformedifnoinsertispresent.Uniquerestrictionsitesareshowninblack.Additionalrestrictionsitesthatcanbeusedforsubcloningareshowninred.Expandedboxbelowshowslocationofsequencingprimers,restrictionsitesforsubcloning,andplacementofinsertionsitewithinthetoxicminigene.

      KitComponents

      Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:

      Storeat(°C)Concentration
      CloningMix1-202.5X
      CloningMix2-2010X
      LinearizedpMiniT™2.0Vector-2025μg/ml
      AmpliconCloningControl-2015ng/μl
      CloningAnalysisForwardPrimer-20100μM
      CloningAnalysisReversePrimer-20100μM
      NEB10-betaCompetentE.coli(CloningEfficiency)-80
      pUC19Vector-200.05ng/μl
      NEB®10-beta/StableOutgrowthMedium4

      Notes:

      TheNEBPCRCloningKitcontainsasufficientsupplyofmaterialstoperform20x10μlcloningreactions.Primersarealsoprovided,allowingscreeningforinsertsbycolonyPCRand/orsequencing.
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