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特别 提示
组分 规格 | 5T | 20T | 50T | 开封后保存温度 | 稳定性 |
A.10 mM EdU | 100 µL | 0.4 mL | 1 mL | -20℃ | 开封后按指定温度保存可有效放置一年 |
B.YF® 488/555/594/647A Azide | 25 µL | 100 µL | 250 µL | -20℃，避光 | |
C.10× Click-iT EdU反应缓冲液 | 500 µL | 2×1 mL | 5 mL | 2-8℃ | |
D.CuSO4 | 200 µL | 0.8 mL | 2×1mL | 2-8℃ | |
E.Click-iT EdU缓冲液添加物 | 15 mg | 60 mg | 150 mg | 2-8℃ |
规格：上述反应次数针对6孔板培养的细胞，不同容器的具体用量可参考附表1。荧光光谱数据：YF® 488 Azide：495/519 nm；YF® 555 Azide：555/565 nm；YF®594 Azide：590/617 nm；YF® 647A Azide：650/670 nm.产品介绍细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。检测细胞增殖最精确的方法是BrdU 法。EdU 法检测试剂盒是BrdU法的革命性突破。EdU（5-乙炔基-2’-脱氧尿苷）是一种嘧啶类似物，在 DNA 合成期整合入 DNA 双链。EdU 法检测基于“点击”反应，一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃作用发生共价反应，形成共价键。本试剂盒中，EdU 含有炔烃，YF®488/555/647A Azide 染料含有叠氮化合物。点击法的 EdU 标记增殖快速有效，易于使用。BrdU 方法需要 DNA 变性（如酸变性、热变性或者用 DNase 消化）暴露出 BrdU，方便 BrdU 抗体结合；而 EdU法只需标准化的多聚甲醛固定和 Triton X-100 促渗就可以使检测试剂进入细胞，只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的 EdU。本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组分，可以用于体外培养细胞的增殖检测。
UE-C6019S/C6019M/C6019L◆YF®488/555/594/647有什么区别？
主要就是检测EDU的物质带的荧光基团不同，检测时发射荧光的颜色不同。实验效果相同，可根据偏好或需求进行选择。◆EdU试剂盒中，固定后3% BSA in PBS的作用是什么？清洗步骤中，BSA可以终止掉未反应的甲醛。◆能否在活细胞中进行Click-iT EdU检测？不可以。虽然EdU是对活细胞进行代谢标记，但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型，检测信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。◆质粒转染表达的荧光蛋白检测与Click反应兼容吗？检测顺序是什么？本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光，故染色后无法直接检测GFP，建议使用GFP抗体间接检测。◆观测到较高的本底干扰，这是什么原因所致？如何减少本底干扰？叠氮化物和炔烃类间Click反应非常有选择性，生物体内几乎不可能有副反应发生，所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。同时，也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click反应对照，以排除自发荧光干扰。此外，您还可在无EdU 体系中进行完整的Click反应，验证Click反应信号的特异性。◆为什么标记样品无信号或特异性信号非常低？如何提高信号？1.请保证试剂使用时为无色的状态，不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液；2.为确保Click反应试剂能够到达核内，细胞需要充分地固定和通透；3.由于铜离子能结合到部分试剂上，这会导致催化Click反应的有效浓度降低。所以在Click反应前，不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂（例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等），对某些含有这些物质的实验样品来说，进行Click反应前，可能需要增加额外的洗涤步骤；4.当铜离子在合适的化合价时，Click反应才有效。Click反应中用到的铜离子为二价铜(Cu2+)。5.延长Click反应的时间至超过30分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click反应试剂再次进行30分钟的孵育，可更有效地提高标记效率。◆如何对细胞核进行复染？试剂盒中配有Hoechst 33342，可以在Click反应后用于细胞核的染色，也可选择使用DAPI。◆可以用于检测植物细胞核内的DNA复制吗?可以。EdU是小分子，可以穿透植物细胞的细胞壁。
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